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DNA/RNA提取試劑盒操作注意事項
點擊次數:2126 更新時間:2022-07-19

  

 

 

DNA/RNA提取試劑盒說明書

AllPureDNA/RNAKit

DNA/RNA提取試劑盒說明書

Cat.No.  K0590 

  保存:室溫

 

組分說明

 

                                              Cat.No.               K0590



                                              KitSize                  50

                                            BufferRL                35ml

                                            BufferRW1                40ml

                                   BufferRW2concentrate           11ml

                                         RNase-FreeWater             10ml



                                    BufferGW1concentrate           13ml

                                   BufferGW2concentrate           15ml

                                             BufferGE                15ml



                                         SpinColumnDM                 50

                                        SpinColumnRM                 50

                                     CollectionTube1.5ml           100

                                     CollectionTube2ml            150

 

產品簡介

 

      本試劑盒可用于從同一細胞或組織樣本中同時純化基因組 DNA 和總 RNA。由于不需要將樣本分成兩份用于不同的純化步驟,該試劑盒可最大限度的回收 DNA RNA。純化的 DNA RNA 被單獨洗脫并可直接用于各種下游實驗。本試劑盒中不包含苯酚和氯仿等有毒物質,無需乙醇沉淀,操作簡單、快捷?;蚪M DNA 可用于 PCRReal-timePCR、SouthernBlotDotBlot、比較基因組雜交(CGH)、基因分析和 SNP 分析;總 RNA 可用于 RT-PCR、Real-timeRT-PCRcDNA 的合成、NorthernBlot、DotBlot 等分析。

 

注意事項

 

1.   預防RNase污染,應注意以下幾方面:

1) 使用無RNase的塑料制品和槍頭,避免交叉污染。

 

2) 玻璃器皿應在使用前于180℃高溫下干烤4小時,塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分鐘,用水*沖洗后高壓滅菌。

3) 配制溶液應使用RNase-FreeWater。

4) 操作人員戴一次性口罩和手套,實驗過程中要勤換手套。

2.   樣品應避免反復凍融,否則影響提取DNARNA的質量。樣品在BufferRL中,可于-70℃保存一個月。

3.   BufferRL在使用前請加入β-巰基乙醇,1mlBufferRL10 μl β-巰基乙醇。加入β-巰基乙醇的BufferRL室溫可保存1個月。

4.   第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在 BufferRW2、BufferGW1 BufferGW2 中加入無水乙醇。

5.   使用前請檢查 BufferRL 是否出現結晶或者沉淀,如有結晶或者沉淀,請于 56℃水浴重新溶解。

6.   所有離心步驟均使用臺式離心機,室溫下進行。

自備試劑:β-巰基乙醇(新開封或提取 RNA 專用)、70%乙醇(用無 RNase 的水配制)、無水乙醇

 

操作步驟

 

1.   材料處理

    1a. 貼壁培養(yǎng)的細胞應先處理為細胞懸液(最大提取量為107 個細胞), 收集細胞,棄盡培養(yǎng)液,加入600μlBufferRL(用前檢查是否加入β-巰基乙醇),反復吹打使其充分裂解。

 注意:一定要棄盡培養(yǎng)液,否則影響裂解和后續(xù)的核酸純化步驟。

    1b. 取不大于30mg的動物組織,液氮研磨成細粉末,加入600μlBufferRL(用前檢查是否加入β-巰基乙醇),或直接加入600μlBufferRL(用前檢查是否加入β-巰基乙醇),勻漿處理。

         注意:勻漿要充分,否則影響RNA產量。

 

2.   將上步所得溶液12,000rpm(~13,400×g)離心3-5分鐘,小心的將上清加入到已裝入收集管(2mlCollectionTube)的吸附柱(SpinColumnDM)中,12,000rpm離心30-60 秒,收集濾液。將吸附柱DM放在一個新的2ml收集管

     2mlCollectionTube)中,室溫或4℃放置,待提DNA

     注意:確保吸附柱 DM上沒有液體殘留,如果有必要可以重復離心,直至所有的液體通過吸附柱DM的膜。總RNA提取

3.   向步驟2所得濾液中加入1倍體積的70%乙醇(無RNase的水配制),混勻。

4.   將上步所得溶液全部加入到已裝入收集管(2mlCollectionTube)的吸附柱(SpinColumnRM)中,若一次不能全部加完溶液,可分次轉入。12,000rpm離心20秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱RM重新放回2ml收集管中。

5.   向吸附柱RM中加入700 μlBufferRW1,12,000rpm離心20秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱RM重新放回2ml收集管中。

6.向吸附柱RM中加入500 μlBufferRW2(使用前檢查是否已加入無水乙醇),12,000rpm離心20, 倒掉收集管中的廢液,將吸附柱RM重新放回2ml收集管中。

7.   重復步驟6

8.   12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液。將吸附柱RM置于室溫數分鐘,以*晾干。

     注意:此步驟目的是去除吸附柱RM中殘余的乙醇,乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(酶切、PCR等)。

9.   將吸附柱RM置于一個新的無RNase1.5ml離心管(CollectionTube1.5ml)中,向吸附柱RM的中間部位加入30-50μlRNase-FreeWater,室溫放置2-5分鐘,12,000rpm離心1分鐘,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。

注意:1RNase-FreeWate體積不應小于30 μl,體積過小影響回收率。

    2)如果要提高RNA的產量,可用30-50 μl新的RNase-FreeWater重復步驟9。         

3)如果要提高RNA濃度,可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,重復步驟9。

 

基因組DNA 提取

 

10.  向吸附柱 DM 中加入 500 μlBufferGW1(使用前檢查是否加入無水乙醇),12,000rpm  離心 20 秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱 DM 放回 2ml 收集管中。

11.  向吸附柱DM中加入500 μlBufferGW2(使用前檢查是否已加入無水乙醇),12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱DM放回2ml 收集管中。

12.  12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液。將吸附柱DM置于室溫數分鐘,以*晾干。

     注意:這一步的目的是將吸附柱DM中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(酶切、PCR等)。

13.  將吸附柱DM置于一個新的無RNase1.5ml離心管(CollectionTube1.5ml)中,向吸附柱DM的中間部位加入100 μlBufferGE,室溫放置2-5分鐘,12,000rpm離心2分鐘,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。

注意:1BufferGE的體積不應小于100 μl,體積過小影響回收率。

   2)如果要提高DNA的產量,將100 μl新的BufferGE加至吸附柱上,重復步驟13。

3)如果要提高DNA濃度,可以將步驟15所得的DNA洗脫液重新加至吸附柱上,重復步驟13。

 

附表 1 吸附柱 DM 和吸附柱 RM 的規(guī)格說明

 

規(guī)格                   吸附柱 DM                 吸附柱 RM

 

最大結合能力          100µgDNA            100µgRNA

最大加樣量               700µl               700µl

 

結合核酸分子量         DNA1530kb         RNA>200 核苷酸

最小洗脫體積              100µl                30µl

 

  

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